任何是外泌体

    什么是外泌体?

 

    外泌体(Exosomes)是人体上皮肿瘤组织细胞核外囊泡(Extracellular vesicles, EVs)的的，多少在30-150nm，由人体上皮肿瘤组织细胞核内的多泡小体(Multivesicular bodies,MVB)与人体上皮肿瘤组织细胞核膜重构后之内分泌量的方法施放到人体上皮肿瘤组织细胞核外，密切来源于于人体上皮肿瘤组织细胞核训练上清及其各式各样体液中，涉及到血夜、淋巴腺液、口水、尿里、爱液、乳水等。

 

    为什么研究外泌体?

 

    外泌体广泛参与细胞间物质运输与信息传递，调控细胞生理活动。同时，外泌体具有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、促进肿瘤发生和转移等作用;此外，外泌体还可以作为“天然的纳米粒子”来进行药物递送。

外泌体样本预处理与分离、保存：

　　外泌体存在于人类或动物的各种体液中，我们可以选择不同的样本来源进行相关的外泌体研究。由于外泌体是来源于细胞质膜内陷的含有脂质双分子层膜结构的多泡小体，分布于胞外基质。为了获得高纯度的外泌体，必须确保有效去除所有的细胞碎片及其他不需要的杂质。

　　1）细胞培养上清              2）血浆/血清

　　3）尿液                            4）脑脊液

　　5）卵泡液                        6）宫腔液

　　7）胆汁                            8）羊水

　　9）腹水                           10）胸腔液

　　不同的实验样本采集时需要注意的地方不一样，如细胞培养上清在收集样本前需换成无外泌体血清培养、血浆样本采集时用一定不能用肝素抗凝管、尿液收集时需要加抑菌剂等。

       从生物体液中分离外泌体的各种方法已经被开发出来，主要根据外泌体的大小、密度、免疫特性等特点进行操作。分离出高纯度的外泌体是我们后续开展外泌体研究的关键步骤，目前差速超速离心是外泌体分离方法中公认的“金标准”，也是高分文章中首选的分离方法。
 

外泌体超离大致步骤

       外泌体鉴定：

　　外泌体分离之后，需要经过一系列鉴定才能确定分离的是外泌体。鉴定方法从物理特征到表面分子标志物，多角度进行鉴定。

       (1) 透射电镜鉴定法：简称TEM，适合外泌体双层囊膜超微结构观察，即通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。
 

 外泌体透射电镜图
 

      (2) 纳米技术颗粒肥料定位介绍法：也叫NTA，该技术能维持外泌体最原始壮态、探测工具转速快，探测工具后能打造外泌体比表面积和浓硫酸浓度产品信息。
 

外泌体NTA图
 

      (3)Western blot大分子式标识物在线检测：外泌体标识球血清酶酶包涵四跨膜球血清酶酶宗族，如CD9、CD63和CD81；体细胞系质球血清酶酶，如肌动球血清酶酶（Actin）和钙磷脂结合在一起球血清酶酶（Annexins）；陆续参与海洋生物功效的大分子式，如凋亡电话转接dna遗传2互作球血清酶酶X（ALIX）、肺部肿瘤易感dna遗传101球血清酶酶（TSG101）、热晕厥球血清酶酶（HSP70、HSP90），并且体细胞系代谢的特情人球血清酶酶。

外泌体Western Blot图（Tian Su et al., ACS Nano. 2019）
 

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      外泌体高通量检测

　　外泌体内含有与细胞来源相关的蛋白质和核酸，可以运输蛋白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等进入受体细胞，参与细胞间通讯。不同细胞来源的外泌体所含有的蛋白成分和RNA不太相同，可作为多种疾病的早期诊断标记物，也能作为靶向药物的载体进行疾病治疗。

　　1. miRNA高通量测序

　　2. 表达谱芯片（人、小鼠）

　　3. lncRNA芯片（人、小鼠）

　　4. ceRNA芯片（人、小鼠）

　　5. 蛋白质组分析（iTRAQ、TMT、Label-free）

　　

      外泌体示踪

 

      对拆分的外泌体开始身体标上或活体示踪，促进企业对内泌体的技能开始进那步的深入分析。阶段适用亲脂性有机活性染料对内泌体开始标上，亲脂性有机活性染料主要的其中包括三类，一要PKH67(黄深绿)和PKH26，第二是DiI(黄色荧光)、DiO(黄深绿荧光)、DiD(颜色荧光)、DiR(深颜色荧光)。

    ACS Nano. 2019 Feb 26;13(2):2450-2462.

 

      外泌体的功用钻研

 

      考察外泌体存在什么样的工作，可不可以将外泌体可以填加感觉生殖細胞教育教育培养液中，与感觉生殖細胞确定共教育教育培养，考察生殖細胞的工作发生变幻，还是将外泌体肌内注射入两栖昆虫型号中，考察两栖昆虫表型发生变幻和在线检测两栖昆虫有关的统计指标，如良性肿瘤转到、血糖水平面、胰岛素皮肤敏各样等。

    Nat Commun. 2018 Jan 15;9(1):191.