外泌体靶向中药治疗递送|胶质母体细胞瘤的反义寡核苷酸中药治疗

胶质母上皮细胞系瘤是最非常致命的原发性脑癌，求美者的的平均质保期不到1年时间内，只要 5%的求美者能活到5年这。胶质母上皮细胞系瘤的标淮中药冶疗是操作割除后设施放疗和替莫唑胺（TMZ）放疗，不过常操作中药冶疗是不足的，且也包括TMZ少部分的大部份数类药物都是有的明显的致毒和副功能，故近年来基因组中药冶疗的研究分析被逐层点赞。

MicroRNA-21（miR-21）是包括胶质母细胞瘤在内的实体肿瘤中上调最高的miRNAs之一，下调miR-21可作为一种干预肿瘤细胞增殖和增加凋亡的方法。细胞外囊泡（EVs）是一种膜源性囊泡，由不同种细胞分泌，参与细胞间的信号传导。本篇文章中作者通过生成靶向胶质母细胞瘤的外泌体（T7-exo），经系统注射将T7-exo与脑部的胶质母细胞瘤结合，提高miRNA-21反义寡核苷酸（AMO-21）的递送效率。因此，T7-exo被认为是AMO-21靶向胶质母细胞瘤的有效载体。

Fig.1 外泌体作用示意图
 

Result

1.RVG-和 T7-exo修饰及装载AMO-21的外泌体特性

作著各自将含RVG-Lamp2b和T7-Lamp2b质粒转染入293T组织，隔离外泌体后再确认WB查验拥有的RVG-exo和T7-exo都可能含有靶向疗法配体。接下来确认电转将AMO-21背包入RVG-exo和T7-exo中，进行实验看见，AMO-21背包入外泌体后对其面积大小不显眼印象。另外，用复印机扫描微电子光学显微镜（SEM）通过观察外泌体在配体修饰语后和AMO-21垃圾装载后的底部形态不明显一定的差异（Fig.1-2）。

Fig.2 RVG-和 T7-exo修饰外泌体及装载AMO-21的外泌体特性观察

2.T7-exo装载AMO-21的体外传递效率

用FAM记号AMO-21s，己经将记号的AMO-21s电进入外泌体中，外泌体本来用DiI确定染料。将此存储后的外泌体与C6受损細胞系共训练24h，用共凝聚电子显微镜和流式的受损細胞系仪考核AMO-21传导的速率。的结果提示，T7-exo传导AMO-21s的的速率高过Unmod-exo和RVG-exo，时用RT-PCR判断C6受损細胞系中的miRNA-21的水平也查验了AMO-21s的传导的速率（Fig.3）。

Fig.3 体外分析RVG和T7修饰外泌体装载AMO-21s后的传递效率

MTT监测最后代表经RVG和T7修饰语后的外泌体对C6组织生殖細胞的勃勃生机大致不作用，而加了PEI25K组的C6组织生殖細胞就有没想到勃勃生机的80%。用外泌体和PEI25K治疗红组织生殖細胞，也遇到PEI25k组中红组织生殖細胞有非常严重的涌入和裂解问题，而于他组与差表组同类，无显著的的涌入和溶血问题。

Fig.4 外泌体的生物相容性观察

3.T7-exo靶向脑部的传递效率

将Dil箭头的外泌体按照尾门静脉打入大鼠中，知道T7-exo在脑袋比别的外泌体有更强的数据信息，这阐明T7-exo就能够更有效地表达AMO-21到脑袋。马上又将Cy5箭头的AMO-21s放到Unmod-exo、RVG-exo和T7-exo中，再将这样的外泌体各分为IV打入SD大鼠中。脑袋数据信息数据彰显，脑子中T7-exo递送AMO-21s的率比Unmod-exo、RVG-exo高；与此同时，肝或其他排毒器官和肾脏也具较高的AMO-21数据信息。

WB导致表现，外泌体上T7配体的量不少RVG配体的量，不过T7-exo的信息传递效果不低于RVG-exo，这也表达了T7是比RVG更有效地的靶向治疗头部的配体。

 

Fig.5 RVG-exo和T7-exo在体内传递到大脑的效率
 

4.装载AMO-21s的外泌体在脑瘤动物模型中的治疗效果

将承载了AMO-21s的外泌体针剂入脑瘤各种动物模式中，的检测到RVG-exo和T7-exo介导的AMO-21s能有效性有效降低脑袋的miR-21水平面，这取决于了RVG和T7配体可能增强了外泌体向脑袋的靶向疗法运输业。

Fig.6 体内递送AMO-21s后对miR-21水平影响
 

外泌体递送AMO-21s的医疗制疗使用效果也可能够PDCD4和PTEN品质来分析评估。伴随PDCD4和PTEN核蛋白在胶质母細胞核瘤中调低細胞核生长期和凋亡，往往PDCD4和PTEN的上浮与AMO-21的医疗制疗使用效果密切相关。成果证明，与其余膜蛋白和外泌体相对来说，T7-exo递送AMO-21s能更有效性地挺高PDCD4和PTEN的体现品质（Fig.7）。

Fig.7 免疫染色结果

 

大鼠在注塑癌肿体细胞膜13日后被处死，同一检查测量癌肿的的各个和占地面积。但是说明，T7-exo/AMO-21s能有郊地减掉癌肿，且注塑了RVG-exo/AMO-21和T7-exo/AMO-21的多组癌肿的各个还到對照组癌肿的各个的二分之一。最后将小药量的T7-exo/AMO-21wifi定位注塑入胶质母体细胞膜瘤大鼠模式化中，但是呈现，当安全使用T7-exo将约42 ng的AMO-21会直接递送回癌肿部位零件时，癌肿的的各个减掉了（Fig.8）。

Fig.8 AMO-21的抗肿瘤效果

 

总结范文

在本探析中，T7肽获评价为一个新的靶点配体，应用在外泌体介导的AMO-21向胶质母体受损神经细胞膜瘤的传导数据。胶质母体受损神经细胞膜瘤的身体外探析和原位胶质母体受损神经细胞膜瘤类别的内部探析揭示，T7-exo比RVG-exo、Unmod-exo和PEI25k对脑胶质母体受损神经细胞膜瘤拥有最高的AMO-21传导数据利用率。