外泌体快运 | 中草药材整理产生的外泌体格仰制肉瘤細胞的增值

背景

中药既是历史上重要的治疗药物，也是新药的重要来源。常山酮（HF）是一种由热敷皂苷衍生而来的小分子生物碱，在不同的细胞系中具有明显不同的抗增殖作用。然而，HF在体外是能抑制MCF-7细胞的生长以及这一过程的潜在机制尚不清楚。

外泌体是一种由细胞自然分泌的纳米大小的囊泡，大小在30-150nm。它由各种脂质、蛋白质和RNA组成，包括microRNAs（miRNAs），这些分子通过外泌体可以在细胞间传递，起到了直接或间接的通讯作用。

本文[1]作者发现HF不仅能抑制MCF-7细胞外泌体的分泌，同时降低了外泌体中microRNA-31（miR-31）的含量。MiR-31通过靶向HDAC2，进一步调节细胞周期调节蛋白的水平，有助于HF的抗癌功能。

Results
1.HF对人乳腺癌细胞MCF-7生长的影响    

要为探讨HF会不会对MCF-7体受损细胞膜的种子发芽带来损害，我们如何设置不相同的HF溶液浓度值（25、50、100、200和400nM）和不相同的時间点（0、12、24和48hr），并凭借MTT和克隆养成探测体受损细胞膜的种子发芽具体情况。工作数据表格发现，HF对身体外养育的MCF-7体受损细胞膜的种子发芽兼具溶液浓度值信任性和時间信任性的阻止功能（Figure.1）。
 

Figure 1 HF能阻止人工甲状腺癌体细胞MCF-7的繁殖

2.HF处理可减少MCF-7细胞的外泌体分泌

为了能让核验中草药需不需要压制MCF-7组织細胞的外泌体的代谢，著者用HF加工处理MCF-7组织細胞并测试了淋巴肿瘤组织細胞锻炼上清的外泌格局。著者后来分別测试了AChE酶活（1种与外泌体膜相关联的特定酶）、BCA密度、散发出电镜（TEM）及外泌体球蛋白（Tsg101、CD63、CD81和CD9），进行以上数据信息，著者挖掘HF可压制MCF-7组织細胞外泌体的的代谢（Figure.2）。
 

Figure 2 HF外理可提高MCF-7外泌体的的分泌
 

3.HF通过抑制外泌体的分泌来抑制MCF-7细胞的增殖

创我先用DiD纺织染料箭头MCF-7内部排出量物量的外泌体，再将除此之外泌体与MCF-7内部共塑造培养，共凝聚脉冲激光扫描软件体视显微镜通过观察到外泌体分散在MCF-7内部质中。紧接着随后创我用各种的用药量的外泌体来正确加工MCF-7内部，然后用MTT法检测工具MCF-7内部的增值能力情況。创我察觉，由于时间推移的用药量的增多，MCF-7内部的增值能力也由于时间推移加强。紧接着创我参观考察了HF和GW4869（一种生活弱酸性中枢神经鞘磷脂酶可治理和改善性剂）对外开放泌体排出量物量的导致。动态统计资料反映，经GW4869预正确加工后，HF对MCF-7内部排出量物量外泌体的可治理和改善性角色将更显然。除此之外，用HF和non-HF外泌体正确加工MCF-7内部，成果表示，HF对MCF-7内部增值能力的可治理和改善性角色变弱。尽管，某些动态统计资料蕴含了HF可治理和改善性外泌体排出量物量概率是HF可治理和改善性MCF-7内部生长期的体制（Figure.3）。
 

Figure 3 MCF-7因素的外泌体对生殖细胞增值能力的后果

​4.HF通过降低外泌体miR-31抑制MCF-7增殖

著者检验了外泌体中84个与乳线癌有关的的miRNAs，发觉MCF-7内部膜在有HF工作和没了HF工作下外泌体中的miRNAs有挺大差异，表中miR-31在HF工作过的外泌体中比non-HF工作的外泌体中比较少。之后著者敲低了外泌体中的miR-31，将不仅如此泌体申请加入肾上腺素受体内部膜致力于基中，发觉敲低miR-31后外泌体对内部膜繁衍的限设计制效应增加。完了著者过描述了外泌体中的miR-31，发觉外泌体可以淡化内部膜的繁衍。之所以，等等数据信息揭示外泌体miR-31就可以可以淡化MCF-7内部膜繁衍（Figure.4）。
 

​Figure 4 外泌体miR-31能增进MCF-7组织细胞的增值

5.miR-31通过靶向HDAC2调节MCF-7细胞的生长

小说作家分开 用miR-31 inhibitor、mimics或HF激励MCF-7癌人体组织肿瘤受损细胞，来转变MCF-7癌人体组织肿瘤受损细胞产出的外泌体中miR-31的总体水平，在用shotgun LC-MS/MS血清组学系统加测肾上腺素受体癌人体组织肿瘤受损细胞MCF-7中核血清的对比描述现象。最终结杲凸显，描述了miR-31 pre-miRNA的外泌体可抑止HDAC2的描述。还有，miR-31敲低/过描述或HF清理过的外泌体可自动调节节HDAC2的描述和H3、H4乙酰化的调整或下降。抑止HDAC2的描述可明显的抑止MCF-7癌人体组织肿瘤受损细胞的上升强度。一直以来，这么多最终结杲呈现miR-31确认靶向疗法HDAC2自动调节MCF-7癌人体组织肿瘤受损细胞的种植（Figure.5）。
 

​Figure 5 miR-31确认靶向药物HDAC2调节MCF-7细胞系的繁殖
 

6.HDAC2通过靶向MCF-7细胞中的G1/S组分对细胞周期环路起调控作用

作者接着检测了HDAC2对细胞周期的调控作用。HDAC2敲低后会使G1期细胞增加，S期和G2/M期减少，这说明了HDAC2参与了细胞周期时钟的调控。在MCF-7细胞G1/S过渡过程中，HDAC2敲低可以抑制细胞周期的组分水平，包括cyclin D1和CDK2，同时增加细胞周期负调控因子p21的水平。此外，HDAC2敲低通过CDK2和cyclin D1转录激活影响pRb（retinoblastoma protein）蛋白磷酸化。

随后作者也检测了用HF或miR-31 pre-miRNA处理细胞后其分泌的外泌体对cyclin D1、CDK2和p21的影响。结果发现，与non-HF外泌体处理组相比，HF外泌体能抑制cyclin D1、CDK2水平，同时提高p21水平；与对照组相比，来自miR-31 pre-miRNA处理MCF-7细胞产生的外泌体降低p21水平、增加CDK2和cyclin D1水平（Figure.6）。
 

Figure 6 HDAC2依据靶点G1/S变为调理酚类化合物限制乳房癌肿瘤细胞的滋生

总的来说，以下毕竟具体分析了HF补救会缩减MCF-7血内部外泌体的挥发（构成miR-31），该外泌体可迁移miR-31到最靠近血内部，有利于促进仰制HDAC2呈现。一并HDAC2可可以通过调理G1/S酚类化合物，如p21、CDK2和cyclin D1来调理血内部时间，于是仰制MCF-7血内部增值能力(Figure.7）。
 

Figure 7 微生态中HF压制MCF-7神经元增值的体制
 

一篇文章总结结尾

可以参考学术论文

[1] miR-31 shuttled by halofuginone-induced exosomes suppresses MFC-7 cell proliferation by modulating the HDAC2/cell cycle signaling axis. J Cell Physiol. 2019 Aug;234(10):18970-18984.doi: 10.1002/jcp.28537. Epub 2019 Mar 27.