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【on-target】AAV沾染肺脏 | 血清型·开启子·注入用水量 | 一本书就GO了!

时段:2023-08-17 照射:


肺脏(Lung)是哺乳动物呼吸系统中最重要的器官,其主要功能是将氧气送入血液,并将二氧化碳排出体外,除呼吸调节功能外、肺脏还承载着防疫、免疫、肺循环、造血等多种重要的功能。肺脏包括支气管、小(细)支气管、肺泡管和肺泡,肺泡是支气管树的终末部分,是肺部气体交换的主要部分,也是肺的功能单位。
 

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肺脏组成及包括内部类形 (Siqin He, et al., J Nanobiotechnology, 2022)   吸呼软件病症是的影响全全球中国人民绿色的常见的病症中之一,中仅不无由什么是基因基因变异会形成的肝部病症,如急慢性梗塞性肺病症、急性咽炎、氏族性肺玻纤化、囊性玻纤化等,此类病症的遗传基因制度化以经被坚持问题导向研究探讨,但依旧贫乏有效的的治愈设计方案,会形成病况进一个步骤严重导致吸呼软件软组织损伤,和是消亡。  

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主耍吸系统病方式 (Jesus Shrestha, et al., Crit Rev Biotechnol, 2020)  

重组腺相关病毒载体(recombinant Adeno-associated virus, rAAV)具有血清型种类多样、免疫原性低、长期稳定表达基因、宿主范围广等优势,在基因功能研究和基因治疗递送载体中占据主导地位。基于转基因动物的局限性,借助rAAV载体高效感染肺脏用于肺部疾病的建模和治疗策略已成为越来越多研究者的选择

 

01  AAV血清型的选择

 

目前AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV6.2ff、AAV9等血清型均被报道可以转导动物肺脏,基于血清型嗜性、注射方式及研究对象的不同,这些AAV对于肺脏的转导效率及感染部位也表现出差异。如AAV9经气管注射主要感染肺泡上皮细胞,对于支气管上皮细胞的感染极少;AAV6和AAV6.2ff经气管注射可以高效转导支气管和肺泡上皮细胞,且在肺类器官中也表现出良好的感染效率,这几种AAV也是目前用于肺部基因递送用的较多的血清型。

肺实质是治疗肺部遗传性疾病如表面活性物质缺乏和间质性肺疾病的关键目标,特别是肺泡II型上皮细胞(alveolar type II,ATⅡ),其表达对表面活性剂功能至关重要的蛋白质,参与免疫反应以及转分化等多种功能,是肺部疾病基因治疗的靶细胞群体。最近,
 


  AAV不同的血清型气管中注谢肺染色体递送转导热效率比(低含水量,2.5E+10vg)  

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AAV-LungM3气管肌内注射靶向治疗ATII   肺脏有的是个较高大动脉血管化的生殖器官,首要功用键是有利于空气中的氧气顺利通过血液的转意,这进程中,肺脏内皮细胞膜(endothelial cells, ECs)至关主要。论述探讨得知,ECs的功用键出错虽然陆续参与很多肺脏常见传染病症的时有发生發展,如漫性赌塞性肺病、肺仟维化、肺大动脉直流高压、新冠肺炎、猛然吸气胎儿窘迫综合管理征、人体免疫性性常见传染病症等。,避免出现了会因起的肝致毒等副功用,为论述探讨肺脏常见传染病症提高打了个种更人身安全、更合理有效的递送质粒。
  AAV-LungX尾门静脉打肺脏转导(5E+11vg/只,左:小爬行动物活体三维成像然而;右:荧光然而)  

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AAV-LungX尾静脉血管注入靶向治疗ECs  

02  启动子选择

 

除了上述提到的基于AAV血清型嗜性外,亦可以借助细胞特异性启动子完成特异性靶向操作。如对于肺泡II型上皮细胞的特异性感染可以借助SP-C(surfactant protein C)特异启动子实现,此外,hFLT1Tie1可以实现内皮细胞的感染,SM22a用于血管平滑肌的特异性感染。

 

03  注射方式的选择及病毒注射量

 

对于肺部的病毒感染,一般递送途径包括两类:系统注射(经血液循环)、鼻内或气管内递送(经呼吸道)系统注射会同时感染其他脏器,病毒被稀释,使得靶向肺脏的病毒减少,因此需要考虑血清型的选择,如AAV-LungX,经静脉注射可以实现特异靶向肺脏内皮细胞的高效转导;呼吸道递送可以实现大程度的特异性递送,并实现肺部的高效表达,同时降低病毒剂量,但会有操作难度限制,且可能导致感染不均匀,有手术风险等缺陷。

  各不相同注谢办法会比较

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肺脏DNA递拱手相送药方案 (Lisa A. Santry et al., BMC Bio. 2017)  

04  应用案例

  萎缩性闭塞性肺妇科熟悉疾病(Chronic obstructive pulmonary disease ,COPD)就是种萎缩性支原体感染性妇科熟悉疾病,不谏为世界各国第五大熟悉病因。2030年华南科技开发学校同济临床医教育谢俊刚传授专业团体在Oxidative Medicine and Cellular Longevity半月刊先生发表的运行中,借着rAAV承载介导MTMR14在COPD小鼠肺里过描述,相结一部验正发展MTMR14过描述能否压制小鼠COPD的进行。  

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AAV经气管路注入介导MTMR14在小鼠肺高传达(Yiya Gu, et al., Oxid Med Cell Longev, 2022)  
病毒码品牌 AAV-MTMR14
實驗家禽 小鼠
注入习惯 气管道滴注
沾染关键部位 肺脏
病毒码用水量 2E+11VG, 50μL
查测的时间 31天
 

2019冠状病毒病(COVID-19)是一种由严重急性呼吸道综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)引发的传染病,是一场全球性公共卫生危机。SARS-CoV-2的核衣壳蛋白(Nucleocapsid,N蛋白)在病毒生命周期的多个步骤中发挥关键作用。2021年8月,Nature Communications杂志刊登了暨南大学吴建国教授团队的工作,该研究揭示了SARS-CoV-2 N蛋白通过NLRP3炎症小体诱导肺损伤的新机制。文中,研究团队借助AAVlung经尾静脉注射在小鼠肺部高表达N蛋白(AAVlung-N)发现过表达N蛋白后,可显著增加IL-1β,IL-6,TNF,CXLC10,CCL2等炎症因子的表达,且肺部有明显的炎症病变及组织损伤。

 

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AAVLung-N尾静脉血管肌内注射介导小鼠肺内过展示的N血清可以通过修改密码NLRP3炎性体引发小鼠肺挫裂伤 (Pan Pan, et al., Nat Commun, 2021)  

2023年5月,暨南大学吴建国教授团队成员再添力作,由潘攀/李永奎/陈欣联合在Signal Transduction and Targeted Therapy杂志发表研究论文。文中,研究团队再次运用AAVlung血清型在小鼠肺部高表达N蛋白,揭示了新冠病毒通过N蛋白抑制细胞凋亡促进病毒复制的分子机制,为新冠病毒的高效传播和感染致病机理提供了新的认识。

 

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借力AAVlung血清型尾动脉滴注靶向疗法肺团体 (Pan Pan, et al., Signal Transduct Target Ther, 2023)  
病毒是什么软件 AAV-Lung-N-EGFP
调查节肢动物 小鼠
肌注方式 尾静脉血管肌内注射
病毒脏器 肺脏
病毒样本的使用量 5E+11VG

特发性肺人造棉纤维化(Idiopathic Pulmonary Fibrosis, IPF)就是种一般的肺泡疫情,被叫做“不再是肝癌的肝癌”。去年 15月,上海生命的意义科学性调查探讨所/复旦高中生物技术临床医学是交叉调查探讨院汤楠实验操作性室在Cell异物上发布调查探讨文献综述。从文中,作家借着了蠕虫病毒媒介介导的遗传基因描述监测政策,经由气管路插管的方试将rAAV2/9-Tgfb1 shRNA注射器到PNX治理 的Cdc42异常小鼠的肺内,下面调的Tgfb1描述,并互相配合很多种实验操作性的方法感觉,AT2细胞系中修改密码的TGF-b数据针对机械厂性弹力驱动软件的肺人造棉纤维化的新况至关更重要。  

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rAAV平台介导Tgfb1展示下降 (Huijuan Wu, et al., Cell, 2019)  
蠕虫病毒类产品 rAAV2/9-Tgfb1 shRNA
研究家禽 小鼠
肌内注射方式方法 气管打瘦脸针
患上部件 肺脏
病原体摄入量 1E+11VG,50μL

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    考生期刊论文 [1] J Nanobiotechnology. 2022 Mar 3;20(1):101.doi: 10.1186/s12951-022-01307-x [2] Hum Gene Ther. 2020 Sep;31(17-18):996-1009.doi: 10.1089/hum.2020.169 [3] BMC Biotechnol. 2017 May 15;17(1):43.doi: 10.1186/s12896-017-0365-2 [4] Stem Cell Res Ther. 2020 Oct 23;11(1):448.doi: 10.1186/s13287-020-01950-x [5] Nat Commun. 2020 Aug 6;11(1):3929.doi: 10.1038/s41467-020-17577-8 [6] Nat Commun. 2021 Aug 2;12(1):4664.doi: 10.1038/s41467-021-25015-6 [7] Signal Transduct Target Ther. 2023 May 9;8(1):194.doi: 10.1038/s41392-023-01459-8 [8] Oxid Med Cell Longev. 2022 Jan 7;2022:9300269.doi: 10.1155/2022/9300269 [9] Cell. 2021 Feb 4;184(3):845-846.doi: 10.1016/j.cell.2021.01.020.
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