最火款式颁布 欲购从速 | 锥体精神元论述重要工具—Thy1-Cre鼠实验英文工作

1、Thy1-Cre鼠配合AAV-DIO- DREADD病毒载体，操纵杏仁核BLA区Thy1阳性细胞改变恐惧记忆的消退和维持

在杏仁核中，Thy1阳性的细胞集中分布在基底外侧部（basolateral），而Thy1阴性的细胞则广泛分布于整个杏仁核。这两类神经元在恐惧记忆的形成、消退（extinction）和消退维持（retention）中分别起到了不同的作用。其中Thy1阳性标记的细胞表现出对恐惧抑制或者被称为“恐惧-关（Fear-Off）”神经元的特性[1]。

在Thy1-Cre鼠BLA注射兴奋性化学遗传学病毒AAV-DIO-Gs-DREADD-IRES-mCherry，同时以AAV-CaMKII-eYFP作对照，可见Gs- DREADD的表达局限在BLA，但是对照病毒的荧光则广泛地分布在整个杏仁核。在动物进行恐惧消退和消退维持实验前30 min于腹腔注射CNO。结果显示，在恐惧消退过程中，使用化学遗传手段增强BLA Thy1神经元的兴奋程度虽然使动物的恐惧行为出现下降，但相比对照动物这一变化在统计上并未表现出显著。然而在恐惧消退维持测试中增强BLA Thy1神经元的兴奋程度可以使动物的恐惧行为显著下降，这提示增加BLA Thy1阳性神经元的活动有助于恐惧记忆消退的巩固。


2、基于Thy1-Cre工具鼠追踪直接投射到腹侧和背侧海马CA1区的图谱

在Thy1-cre工具鼠的腹侧海马（vCA1）和背侧海马（dCA1）先后注射表达绿色荧光的Helper病毒和表达红色荧光的RV病毒，同时感染2种病毒的起始神经元（starter cell）共标记为黄色[2]。



3、条件性敲除BIN1改变神经元活动性

使用Thy1-Cre鼠和Bin1flox/flox鼠杂交，从而在兴奋性神经元中特异性地敲除Bin1基因。使用c-Fos染色标记活动的神经元数量。结果表明，在引入外界刺激的情况下，在海马及压后皮层中对照组小鼠的c-Fos阳性细胞数量均显著高于Bin1敲除组。但是在将动物暴露在新环境后，Bin1敲除鼠齿状回的c-Fos阳性细胞数量高于对照鼠。以上结果表明，在兴奋性神经元中敲除Bin1可以改变神经元的活动[3]。


锥体神经元参与多种生理过程，而Thy1-Cre工具鼠的出现可实现特异性针对锥体神经元操控，是一项重要的实用技术手段，目前，银河集团官网 生物已制备成熟的Thy1-Cre小鼠，同时，为配合Cre鼠的多种应用策略，银河集团官网 现推出Cre鼠+AAV病毒打包促销活动：



相较于转基因小鼠，借助病毒载体介导的Cre系统实现特异性操作神经元或基因的目的，同时可以大大缩短实验的周期，另外，多种多样的病毒载体，可以最大限度的满足各类实验的需求。各类病毒载体的特点如下：

可以借助Cre品系的小鼠和Cre依赖表达的病毒载体结合使用，达到特异性对某些细胞的标记和操控目的。运用神经示踪技术对大脑特定神经环路的结构和功能进行解析时，亦可以借助Cre重组酶系统和AAV血清型（比如rAAV2/9、rAAV2/retro、rAAV2/1）结合适用，达到特异性对神经环路标记和功能研究的目的。


在实际进行实验课题过程中，病毒载体辅助和Cre小鼠的配合使用即有互补性，又能相互验证，成为动物体内研究尤其是神经科学领域研究中不可或缺的助力。

参考文献

[1] Nat Commun. 2016 Oct 21;7:13149.doi: 10.1038/ncomms13149.

[2] Front Neural Circuits. 2021 Apr 14;15:643230.doi: 10.3389/fncir.2021.643230.

[3] PLoS One. 2019 Aug 13;14(8):e0220125.doi: 10.1371/journal.pone.0220125

[4] Sci Adv. 2019 Feb 20;5(2):eaat3210. doi: 10.1126/sciadv.aat3210.