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银河集团官网 双十一活动国庆•研发不无故缺席 | 双萤光素酶测试实验操作——体系学习的工具

时间段:2021-11-04 点击率:

 

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双萤光素酶报告单系统性推荐

双萤光素酶检验实验设计中的双萤光素酶涵盖2种,的是用于统计人类基因的萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase简称F-Luc),别的种是充当内参的海肾萤光素酶(Renilla luciferase简写R-Luc),两个萤光素酶的底物和辅分子各种不同。F-Luc要有萤光素、O2、ATP、镁铁离子等,会亮颜色搭配黄浅绿色,光谱550-570nm;R-Luc仅要有腔肠素和O2,光谱480nm。在上皮神经元行同时描述F-Luc和R-Luc,F-Luc充当汇报遗传DNA组想法目的性遗传DNA组描述的优化,R-Luc充当内参遗传DNA组,为检验具备一标准线(提高重要波动各种因素如训练上皮神经元的颗数,上皮神经元转染和裂解的成功率对探析更准性的危害)。所购成的汇报体统常见应用于靶遗传DNA组手机验证和启动的子催化活性的探析。

 

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运用分享

●靶DNA效验

miRNA主要的可以确认功能于靶什么是染色体组的3’UTR起功能(挥发或限制全文翻译),将需求什么是染色体组3’UTR(纯天然型和搭配位点突变性型)字段建设方案至膜蛋白中计划书范文什么是染色体组F-Luc的3’端,可以确认非常过抒发miRNA后,计划书范文什么是染色体组抒发的转换(萤光素酶的特异性减少或者是相同),来肯定miRNA与靶什么是染色体组3’UTR的功能位点。

●启动时子几丁质酶调查

转录系数最主要进行角色于靶什么是遗传什么是遗传基因遗传组的进行子起角色,将的目的什么是遗传什么是遗传基因遗传组进行子区字段重命名汇报单什么是遗传什么是遗传基因遗传组F-Luc的进行子,进行共表示转录系数后,汇报单什么是遗传什么是遗传基因遗传组表示的转变,来敲定转录系数与靶什么是遗传什么是遗传基因遗传组进行子运用位点及对靶什么是遗传什么是遗传基因遗传组的角色。

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技木路线地图

依照进行测试效果设计的概念进行测试方式—预测分析运用位点--营造野生植物/DNA变异报告单DNA媒介系统化---共转染组织细胞---检侧酶活
 

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多见运用目标方向整理

● 查验miRNA同mRNA靶点互作。将靶mRNA的3’UTR编码回文序列插进该报告基因组各种载体,再共转为该miRNA,如若萤光素酶特异性减低,则显示为其靶编码回文序列。 

● 验证miRNA同circRNA靶向互作。将circRNA序列插入报告基因载体中F-Luc的3’UTR区域,检测萤光素酶活性。 

● 验证miRNA同lncRNA靶向互作。将lncRNA序列插入报告基因载体中F-Luc的3’UTR区域,检测萤光素酶活性。

● 启动子活性分析。将启动子区域序列进行分段截短,再分别构建入报告基因载体,检测其启动子活性。

● 验证特定转录因子同启动子的作用。将启动子区域插入报告基因载体,同时在实验细胞中共转该转录因子,分析转录因子过表达是否提高萤光素酶活性。 

● 分析信号通路是否激活。将该信号通路的下游响应原件序列构建入报告基因载体,在不同上游信号条件下,萤光素酶活性代表了通路的下游响应。

 

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