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FFPE石蜡样表两组学满足预案

时长:2024-07-10 关注度:

福尔马林固定石蜡包埋(Formalin Fixed Paraffin Embedded,FFPE)样本是临床上长期保存病理样本的常用方法,可以和临床数据(如患者临床资料,患者生存预后信息,用药和治疗疗效等)相关联,为确定疾病的发生发展机制研究、生物标志物和药物靶标提供了巨大的资源,是进行回顾性研究的不二之选。但FFPE处理会使组织中的核酸发生不同程度的降解,在过去由于技术受限使FFPE样本无法发挥自身的价值。随着技术的不断突破,针对石蜡样本提供了全套的解决方案。

 

1、单细胞转录组解决方案---­­­­­­­10x Genomics Flex

 
10x Genomics Flex可固定 RNA 的瞬时表示方式工作状态,治疗了单細胞范本保存货运、多范本大批量治疗及及混样测序的问題。根据FFPE范本,安全在使用二jia ben脱蜡,安全在使用胶原酶、胰蛋白酶酶等几种酶来消化吸收公司,配制单細胞浮悬液,行而抽核到細胞核范本;建库时完成靶点什么是基因遗传的探根据交配指标 RNA 原子后接的工作原理,行而达到文库建立的全过程。10x Genomics Flex可不可以用于阐述数万人个至数万人个細胞核的什么是基因遗传表示方式,能够对人或小鼠的 FFPE 范本完成单細胞转录组阐述。  

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图1. 10x Genomics Flex操作步骤  

应用案例:FFPE组织的单细胞+空转+原位分析联合绘制高分辨率乳腺癌微环境图谱

该研究对一个乳腺癌FFPE 样本进行连续切片,采用单细胞基因表达(Flex,scFFPE-seq),空间转录组(Visium CytAssist)和原位技术(Xenium)对乳腺癌FFPE 样本进行检测。通过这三种数据的联合分析,实现了FFPE样本单细胞水平下基因表达,空间信息及原位基因表达信息的整合。其中Flex和CytAssist数据联合分析鉴定出17种不同的细胞类型,再通过将转录本映射到 Xenium中,以单细胞分辨率在空间层面上解析这些细胞类型及其基因表达特征,从而展示了样本高空间分辨的全转录组信息。

 

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图2. FFPE Flex和CytAssist的細胞型号注脚  

2、空间转录组解决方案--- Cytassist & HD

 

10X Visium Cytassist

10x Visium CytAssist技術设计怎么写业已发布就颇受注目,一方面非凡解決了过去设计怎么写在FFPE子样本量的难处,有时候对子样本量追求更低,以优秀的数据分析呈现颇受差评。应用于CytAssist仪器设备开始检侧,可跟据聚集长宽比开始轻松采用(6.5mm×6.5mm 或11mm×11mm)。  

图3. 10x Visium CytAssist玻片
 

10X Visium HD

与原则Visium可不一样,比起来于原则Visium的55 μm 点阵、五边形摆放的警报点,HD则分为了2 μm的棱形维持网格小图案,彼此期间期间都没有厚度,极大升级了警报溶解度,可实行单血体肿瘤细胞膜的粪便率。Visium HD网上平台展示 了全转录组测序,兼容动物群做人和小鼠,兼容聚集款式是FFPE聚集范本。Visium HD可以位置定位聚集驻留血体肿瘤细胞膜群,包扩免疫系统血体肿瘤细胞膜或癌血体肿瘤细胞膜,看到患者的彼此功效和对皮肤疾病或控制响应的提供。  

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图4. 10x Visium HD玻片  

应用案例:10x HD空转解析肠癌微环境

Visium HD的单组织鉴别率就能编写差异的免疫系统检测组织群,并监测恶性肿瘤轮廓的差异基因遗传展示,以挑战免疫系统检测组织群在TME中的暗藏功绩。十二指肠道癌是一种种会影响十二指肠或肠道的癌证,是全时代最应见的癌证型之五,可不可以影响可怕负面影响和死,十二指肠道癌的概率根据多少岁的增长期而加入。该深入细致分析将全转录组和靶向药物原位大环境的技术相结合在一起,深入细致地揭露了TME的繁复性和情况性,体现了大环境大环境对解读癌证异质性和进况的重要的性。  

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图5. 科研路线地图  

3、FFPE转录组解决方案

 

转录组研究对于理解基因组功能元件、揭示细胞及组织中分子组成以及探索机体发育和疾病机制具有重要作用。通过mtk量测序对FFPE中lncRNA 和mRNA进行测序分析。

 

石蜡样本实测数据显示:

1)取4个不同降解程度的FFPE-RNA样本(DV200在60%-80%之间),用其进行文库制备文库及NGS分析。

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  2)4个FFPE范本的表观遗传组对比分析率均在85%以上的,且均有较高的转录本测试数。

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图6.各种各样本FPKM大提琴图  

4、蛋白组解决方案---4D DIA & Astral蛋白组

 
特征提取FFPE子子样品做好对比蛋清酶质组学探究,不错积极主动灵活运用稀少疾患或肿癌等子子样品,探究疾患发生新机制,发现了与疾患检测、分几型、效果与疗法融洽相关的的生物工程标志logo物。主要包括DIA或 Astral技木做好720全景式的数剧采集程序,.漏地换取子子样品时所有阴阳离子的基本魂晶数据信息,更重的程度鉴定结论子子样品中的低丰度蛋清酶。  

FFPE实测数据显示:

配合SDS PAGE条带和核蛋白消费量来去质量检查鉴定,用其来去质谱分享。 FFPE样品的淀粉酶检验数电动车续航到4000+。

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图7.FFPE SDS PAGE最后  

5、基因组解决方案---WES

 
全外显子组测序(whole exome sequencing, WES)指充分利用捉捕系统将全全人类dna遗传组的外显子领域DNA捉捕聚集后进行高通芯片量测序,会随便遇到与蛋清质的功能进化关联的四核cpu苷酸位点进化(Single nucleotide variants,SNV)、导入缺少位点(InDel,Insertion/Deletion)和机构进化位点(SV,Structure Variation)等数据。以人体全人类dna遗传组概述,现出去显子(蛋清质识别码区)只占全人类dna遗传组的1%,但人体全人类dna遗传组85%致病性变异都出去显子领域,为此都具有至关重要重大意义。  

FFPE WES实测数据显示:

分別猎取率(ontarget ratio)达到到60%-80%这些。

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参考文献

【1】Janesick A, et al. High resolution mapping of the tumor microenvironment using integrated single-cell, spatial and in situ analysis. Nat Commun. 2023 Dec 19;14(1):8353. PMID: 38114474; PMCID: PMC10730913. 【2】Oriol Llora-Batlle, 10x Genomics Gene Expression Flex is a powerful tool for single-cell transcriptomics of xenograft models. bioRxiv. 2024. 【3】Michelli F. Oliveira, et al. Characterization of immune cell populations in the tumor microenvironment of colorectal cancer using high definition spatial profiling. bioRxiv. June 5, 2024. 【4】Trinks A, et al. Robust detection of clinically relevant features in single-cell RNA profiles of patient-matched fresh and formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) lung cancer tissue. Cell Oncol (Dordr). 2024 Feb 1. PMID: 38300468. 【5】Eckert MA, et al. Proteomics reveals NNMT as a master metabolic regulator of cancer-associated fibroblasts. Nature. 2019 May;569(7758):723-728. PMID: 31043742; PMCID: PMC6690743. 【6】Harel M, et al. Proteomics of Melanoma Response to Immunotherapy Reveals Mitochondrial Dependence. Cell. 2019 Sep 19;179(1):236-250.e18. PMID: 31495571; PMCID: PMC7993352. 【7】Coscia F, et al. A streamlined mass spectrometry-based proteomics workflow for large-scale FFPE tissue analysis. J Pathol. 2020 May;251(1):100-112. PMID: 32154592. 【8】Zhou Z, et al. Homologous recombination deficiency (HRD) can predict the therapeutic outcomes of immuno-neoadjuvant therapy in NSCLC patients. J Hematol Oncol. 2022 May 18;15(1):62. PMID: 35585646; PMCID: PMC9118717.
 

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