【Nature Neuroscience】抑癌遗传基因身体功能模块需求新妙招：AAV CRISPR变异库！

胶质母肿瘤细胞瘤（Glioblastoma multiforme）是脑癌中身故率比较高和通普通的这种，是除脑干胶质瘤外生存率现象最不积极进取的精神末梢精神系統肝癌。

雪上加霜的是，目前的所有治疗手段都无法治愈胶质母细胞瘤患者，患者的中位生存期仅有12.2-18.2个月。因此，全世界的科学家、医生都在努力检测和治疗这种恶性疾病。
在基因检测层面，人们对胶质母细胞瘤患者进行的基因图谱分析发现了223个基因中的453个突变位点，并最终找出71个显著突变基因（SMGs）。然而，大量新发现的基因功能从未被解读，特别是这些基因在胶质母细胞瘤中的作用尚不清楚。

而由于不同患者个体中的基因突变组合不同，我们难以解释复杂的突变与疾病的因果关系，也造成胶质母细胞瘤患者病程的差异化及抗药性的不同。
因此，我们需要对胶质母细胞瘤进行深入的基因功能分析和表型定量测定，这对于治疗该疾病至关重要。但是，目前没有任何一项研究能够给出结论，说明在患者中发现的某些突变基因能够驱动正常细胞转化为胶质母细胞瘤。

本月一，出自于耶鲁高中医学专业院的华人朋友科学性家Sidi Chen与德国巴塞尔的Randall J Platt讲师，并且CRISPR区域大神张锋讲师战略合作，在Nature Neuroscience发表过了全新操作[1]。你借助于AAV电脑病毒质粒介导的在体CRISPR扫苗技巧水平，在完完全全免疫力催化活性的小鼠脑中，运用获得测序途径读取硬盘变异参数和转录混合物析等多技巧水平，取得成功地需求了系统出现脑胶质母神经细胞瘤造成的根本基因组变异。 银河集团官网 生物 一直关注肿瘤研究领域的重大研究进展，为科研工作者提供优质的病毒工具和整体解决方案，助力临床转化和基因治疗！
实验结果与结论：

1. 脑定位注射AAV-CRISPR库诱导胶质母细胞瘤的产生

为了能在小鼠脑中直观加测胶质母上皮细胞核瘤相关的的有效变动dna技能，编辑建设一堆套鉴于AAV质粒和CRISPR枝术的在体检测营销策略，直观在小鼠脑原位整合胶质母上皮细胞核瘤对模型（图1）。
图1 AAV-CRISPR需求手段 依据将抑癌什么是什么是基因（mTSG）库（该库含有重要性Trp53的sgRNA，广泛用于推动小鼠聚集的肉瘤再次发生，亦含有别的的为显著突变性什么是什么是基因靶点sgRNA）针剂到脑中，协调MRI扫码，小说作家发现了针剂mTSG库的家禽严重有了肉瘤，且家禽的求生阶段亦严重较低（图2）。这说明书AAV-CRISPR手段能在小鼠身体内成脂肉瘤的引发。 图2 针剂mTSG突然变化库的小鼠脑中 比较明显出现了了肿癌 2. AAV-mTSG注射的小鼠脑肿瘤展现了胶质母细胞瘤的特点
完成免疫系统组化科学实验，作家察觉到AAV-mTSG注塑的小鼠主产生的癌症越来越很深，其的特点英文与全人类胶质母体癌细胞瘤用户的癌症的特点英文越来越像，报错AAV-mTSG成功的英文诱导型了胶质母体癌细胞瘤建模 （图3）。
图3 AAV-mTSG注谢的小鼠脑良性肿瘤突显了胶质母細胞瘤的特征英文 3. 靶向测序手段筛选到多个胶质母细胞瘤突变基因
创造出一个整治的必要性在找在了肺部肿瘤时有发生的重点碳原子靶点，想要高于此必要性，编辑软件应用靶点得测序（Targeted-capture sequencing）的方法，在AAV-mTSG鼠的脑中需求在了许多突变的基因遗传（图4）。
图4 用对sgRNA的靶向疗法测序手法挑选到的若干意见胶质母生殖细胞瘤关键性基因组突然变化 可以通过癌症晚期图谱讲解，与与耶鲁大学生胶质瘤血上皮细胞库的校验，原著者讲解了突然变化dna的作用，原著者查证AAV-CRISPR软件在校园营销推广活动的环节之中所构建的原位胶质母血上皮细胞瘤小鼠模式化会化学发光法会发现要点的淋巴肿瘤抑癌dna靶点（图5）。
图5 恶性淋巴肿瘤图谱介绍淋巴肿瘤發生的关健变动DNA 4. 并发突变分析（Co-mutation）发现高频并发基因
顺利通过连接数转变性概述，作著从累计1540对隐藏的转变性DNA中挑选到76对具取得作用的转变性DNA，且某些DNA也一同在人胶质母肿瘤细胞瘤客户脑中引发一同转变性（图6），举个例子RB1和TP53, PTEN和RB1, RASA1和STK11等一同转变性。 图6 高并发变动进行分析选择时变动的要点dna 5. sgRNA Minipool技术验证突变靶点
接下去来，写作者应用sgRNA小形变异库测试上文显示的高主要性变异表观遗传或各自变异表观遗传的工作，手段如同7a，显示多或多对变异表观遗传我认为也可以诱导型胶质母体细胞瘤的存在（图7）。 图7 sgRNA Minipool技术设备验正变动靶点的有害 6. 转录组分析胶质母细胞瘤不同突变细胞的转录特性
实现对各个转变DNA遗传导致的胶质母组织体細胞瘤使用mRNA测序，笔者司法鉴定了各个转变组织体細胞的转录因素（图8）。列如 ，实现特别Rb1和Nf1转变组织体細胞，笔者看到了616个和986个在Rb1组织体細胞和Nf1组织体細胞高体现出的DNA遗传（图8b）。实现丰富的分享，例如互相转变，我们看到Mll3转变会比较凸显的干扰Nf1转变组织体細胞的转录组体现出，而Zc3h13DNA遗传转变则会比较凸显的干扰Rb1转变组织体細胞的体现出。
图8 转录酚类化合物析不同于突然变化组织的基因遗传传达的情况 7. 转录组分析与化学疗法耐药性
文尾，做者开发了抗癫痫药方法的RNA测序實驗（图9），没想到表明Rb1人类基因组变异的胶质瘤受损细胞中Zc3h13或Pten人类基因组人类基因组变异会加强TMZ放疗抗癫痫药的耐药肺结核效性，这提示信息未来是什么的肺癌必须 要考虑不同于人类基因组变异人类基因组的耐药肺结核效性状况。
图9 转录组学分折发展耐药性DNA突变的 总结：
应用AAV木马的载体，配用CRISPRdna复制粘贴水平，诗人引入了了套其极具的特色的身体抑癌dna选择方法，为末来恶性肿瘤变化dna的选择具备了新的法。让我们祝贺Chen副教授的出色工作的圆满发表文章，愿末来有许多的新一轮发觉才能助力人体对敌恶性肿瘤。 参考文献：
[1] Chow RD, Guzman CD, Wang G, Schmidt F, Youngblood MW, Ye L, et al. AAV-mediated direct in vivo CRISPR screen identifies functional suppressors in glioblastoma. Nature neuroscience. 2017.